PrimaCell™大鼠肝竇內(nèi)皮細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

ATP酶法冰凍切片動物肌肉組織分型染色試劑盒20  20315-25-7原B1說明書  Proanthocyanidin B1

MouseHistamine,HISELISA試劑盒小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  480-36-4蒙花苷品牌  Buddleoside

小鼠原肌球調(diào)節(jié)蛋白3(TMOD3)ELISA試劑盒 ，英文名： TMOD3 ELISA Kit  343-27-1鹽酸去氫駱駝蓬堿規(guī)格  Harmine 

猴載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA檢測試劑盒MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISAKit 96T/48T  1241-87-81-咖啡酰奎寧酸  Cyclohexanecarboxylicacid

犬基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)試劑盒 Canine Maix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit  柴胡皂苷B說明書  Saikosaponin B
133-05-1細辛脂素  Asarinin   英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規(guī)格：96T/48T

133-04-0細辛脂素  Asarinin  英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規(guī)格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷說明書  Neohesperidin   英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長激素(RatFSH)規(guī)格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷規(guī)格  Neohesperidin  英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長激素(RatFSH)規(guī)格：96T/48T

13241-28-6大黃酚-8-O-葡萄糖苷品牌  Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside   英文名稱RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游離睪同(Free-Testoterone)規(guī)格：96T/48T
英文名稱HumapPELISAKit人血栓前體蛋白(TpP)規(guī)格：96T/48T  911819-08-4OphiopojaponinC  Ophiopojaponin C

化線粒體蛋白質(zhì)濃度定量測定試劑盒20  19885-10-0澤瀉醇A說明書  Alisol A

RatInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  18674-16-3澤瀉醇A-24-醋酸酯品牌  Alisol A 24-acetate

小鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)ELISA試劑盒 ，英文名： REG-1a ELISA Kit  17306-46-6野漆樹苷規(guī)格  Rhoifolin

小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA檢測試劑盒MousecoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 96T/48T  122413-01-8雞屎藤苷酸甲酯  paederosidic acid methyl ester
PrimaCell™大鼠肝竇內(nèi)皮細胞試劑盒說明書89412-79-3竹節(jié)香附素A說明書  Raddeanin A  組織丁酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20

88915-64-4羅漢果苷IV規(guī)格  Mogroside IVe   組織低密度脂蛋白膽(LDL-Cholesterol)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20

88901-45-5羅漢果皂苷ⅡA2  mogroside ⅡA2   組織單胺氧化酶B型(MAO-B)活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒20

88901-42-2羅漢果皂苷ⅢA1說明書  mogroside ⅢA1   組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SI1)活性熒光定量檢測試劑盒20

88901-41-1羅漢果皂苷IVa  mogroside IVa   組織超長鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。