PrimaCell™人牙周膜成纖維細(xì)胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人牙周膜成纖維細(xì)胞試劑盒 | 英文名稱 | | 貨號 | EYX99544 |

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明; 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 運(yùn)輸和保存; 視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。 1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
 操作要點(diǎn); 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 犬血管緊張素1-7(Ang1-7)試劑盒 Dog angiotension 1-7,Ang1-7 ELISA kit 502-65-8番茄紅素說明書 lycopene 英文名稱HumaissuefactorpathwayinhibitorELISAKit人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 81-27-6番瀉苷A品牌 Sennoside A 超敏型ECL印跡化學(xué)發(fā)光溶液A液:100毫升B液:500微升1000cm2 128-57-4番瀉苷B規(guī)格 Sennoside B Ratglucocoicoidreceptor-β,GR-βELISA試劑盒大鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 37271-16-2番瀉苷C Sennoside C 小鼠轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)ELISA試劑盒 ,英文名: ATF6 ELISA Kit 37271-17-3番瀉苷D說明書 Sennoside D 6537-80-0菊苣酸品牌 Cichoric Acid 組蛋白H3-K18(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等 65-19-0鹽酸育亨賓品牌 Yohimbine 組蛋白H3-K14乙酰化檢測試劑盒10/20等 64-86-8秋水仙堿說明書 Colchicine 組蛋白H3-K122(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等 64849-39-4甜葉懸鉤子苷說明書 Rubusoside 組蛋白H2B-K5乙?;瘷z測試劑盒10/20等 64849-39-4甜茶苷說明書 Rubusoside 組蛋白H2B-K46乙?;瘷z測試劑盒10/20等 層連蛋白/板層素(LN)ELISA檢測試劑盒MonkeyLaminin,LNELISAKit 96T/48T 20261-38-5銀杏酸(C13:0) Ginkgolic Acid (C13:0) 犬球蛋白E(IgE)試劑盒 Canine Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit 35825-57-1隱丹參酮說明書 Cryptotanshinone 英文名稱HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorSolubleReceptor,PDGFsRαELISAkit人血小板源性生長因子可溶性受體α(PDGFsRα)規(guī)格:96T/48T 905-99-7隱綠原酸品牌 Cryptochlorogenic acid 化微粒體1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性比色法定量檢測試劑盒20 印烏堿規(guī)格 Indiaconitine Ratinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISA試劑盒大鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 552-59-0櫻黃素 Prunetin PrimaCell™人牙周膜成纖維細(xì)胞試劑盒20874-52-6柴胡皂苷D Saikosaponin D 英文名稱RatPhosphoinositide-3kinaseELISAKit大鼠1脂酰肌醇三羥基激酶(PI3K)規(guī)格:96T/48T 2086-83-1小檗堿 Berberine 英文名稱RatPhosphoinositide-3kinaseELISAKit大鼠1脂酰肌醇三羥基激酶(PI3K)規(guī)格:96T/48T 20831-76-9龍膽苦苷品牌 Gentiopicroside 英文名稱RatPGFElisakit大鼠前列腺素F型(PGF)規(guī)格:96T/48T 20784-50-3補(bǔ)骨脂乙素品牌 Isobavachalcone 英文名稱RatPGFElisakit大鼠前列腺素F型(PGF)規(guī)格:96T/48T 20736-09-8柴胡皂苷A規(guī)格 Saikosaponin A 英文名稱RatPGE1ELISAKit大鼠前列腺素E1(PGE1)規(guī)格:96T/48T |