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人腦成纖維細(xì)胞提取物【Human Brain: Normal Brain Fibroblasts Derivatives】

人腦成纖維細(xì)胞提取物是從人原代腦成纖維細(xì)胞提取的，人原代腦成纖維細(xì)胞從正常人腦成纖維組織制備。正常人腦成纖維肌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

手足口病腸道病毒（EV71）單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Ethyl 2-(3-cyano-hydroxyphenyl)-methyl,3-thiazole-carboxylate1617982

手足口病科薩奇A16病毒（CoxA16）單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Ethyl 2-(3-cyano-isobutoxyphenyl)-methyl-thiazolecarboxylate18445

手足口病EV71型/CoxA16型病毒雙重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Ethyl 2-(3-formyl-hydroxyphenyl)-methylthiazole-carboxylate1617981

手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-methylthiazole-carboxylate1617979

諾如病毒G1/ G2分型雙重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Febuxostat143非布索坦
N4-Benzoylcytosine  26661-13-2  中文名：N4-苯甲酰基胞嘧啶  分子式：C11H9N3O2    DPD臭氧測(cè)定試劑盒   DPD ozone reage kit

Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone  3669-41-8  中文名：2,4-二羥基苯基芐酮  分子式：C14H12O3    臭氧快速試劑盒   Ozone rapid reage kit

5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  13574-13-5  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6    DPD余測(cè)定試劑盒   DPD residual  test kit              

N6-Benzyladenine  1214-39-7  中文名：N6-芐基腺嘌呤  分子式：C12H11N5    水樣中離子（Hg2+）濃度測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣

Benzidamine hydrochloride  132-69-4  中文名：鹽酸芐達(dá)明  分子式：C19H24ClN3O    水樣中六價(jià)鉻離子（Cr6+）濃度測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣
胰島素樣生長(zhǎng)因子I（57-70）  Insulin-like Growth Factor I (57-70)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠尾加壓素2受體(S2R)ELISA試劑盒 ，英文名： S2R ELISA Kit

胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ（69-84）  Insulin-Like Growth Factor II(69-84)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠味覺受體1型成員2(TAS1R2)ELISA試劑盒 ，英文名： TAS1R2 ELISA Kit

白介素-1β轉(zhuǎn)化酶底物  Interleukin-1β Convertase Substrate  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA檢測(cè)試劑盒MousePepsinELISAKit 96T/48T

下鈣素  Katacalcin  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA試劑盒 ，英文名： Pepsin ELISA Kit

肯普肽  Kemptide  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶(PG)ELISA試劑盒 ，英文名： PG ELISA Kit

運(yùn)動(dòng)升壓素  Kinetensin  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶原A(PGA)ELISA試劑盒 ，英文名： PGA ELISA Kit

層粘連蛋白（925-933）  Laminin (925-933)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃蛋白酶原C(PGC)ELISA試劑盒 ，英文名： PGC ELISA Kit

層粘連蛋白（929-933）  Laminin (929-933)  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃動(dòng)素(MOT)ELISA試劑盒 ，英文名： MOT ELISA Kit

層粘連蛋白九肽，酰胺  Laminin Nonapeptide, Amide  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒 ，英文名： MTL ELISA Kit

白細(xì)胞焦激肽（4-8）；Pheromonotropic五肽  Leucopyrokinin (4-8);Pheromonotropic Pentapeptide  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 小鼠胃泌素(GAS)ELISA試劑盒 ，英文名： GAS ELISA Kit
人腦成纖維細(xì)胞提取物說明書Trenbolone heptanoate  中文名：  分子式：C25H34O3    魚球蛋白M（IgM）ELISA試劑盒  

Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate  中文名：群勃龍環(huán)己甲基碳酸酯  分子式：C26H34O4    魚類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒           

Trenbolone acetate  中文名：  分子式：C20H24O3    愈創(chuàng)木酚   50g

Trenbolone  中文名：群勃龍  分子式：C18H22O2    Guaiacol   100g

Trehalose  中文名：海藻糖  分子式：C12H22O11    鹽酸胍   100g

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。