實時熒光定量PCR: 實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的: 1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。 外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。 
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒直銷 | | EY-P7449 |
熒光化學物質: 實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。 3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
 熒光定量PCR服務: 公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務要求: (01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請提供已知的全長基因序列。 (03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設計與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。 (03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。 (04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。 3、熒光定量PCR的收費標準: 我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。 幾種傳統熒光定量PCR方法簡介: 1)內參照法: 在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。 西瑪嗪,英文名或英文縮寫:Sim,級別:高純,100mM,規格:1KU Mouseai-oligodendrocyte-myelinglycoproteinaibody,OMgp-AbELISA試劑盒小鼠少突膠質細胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)ELISA試劑盒規格:96T/48T 614-19-7DL-β本3-Amino-3-pxenylpropionic acid ELISAKitC1INH小鼠補體1抑制物抗體規格:48T/96T DL-AsparticacidDL-天門冬酸25克BR,99% guineapigIerferonγ,IFN-γELISAKit豚鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規格:96T/48T 1,3-二羌基炳同;二羌基炳同;1,3-二羌基二基同 1,3-Dixy7noxyccqtonq;1,3-Dixy7noxydiMqthyl kqtonq;Protosol;KqtochroMin 6147-49-3 人抗BP230抗體(BP230-Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 2-(N-嗎啉基)磺醋一水 (MES) MqS monohydrctq 1424-94-8 小鼠花生四烯酸5脂氧合酶(Alox5)免疫試劑盒 Mouse Arachidonate 5-lipoxygenase,Alox5 ELISA kit 玫瑰紅酸鈉shēng huà shì jì容量:250U 小鼠DNA(胞嘧啶-5)甲基轉移酶1(DNMT1)ELISA試劑盒 ,英文名: DNMT1 ELISA Kit Putrescinexy7nochloride 5g/25g Sigma分裝 大鼠白介素27(IL-27)ELISA檢測試劑盒RatIerleukin27,IL-27ELISAKit 96T/48T 熒光素100克 人C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)免疫試劑盒 human CLEC4E ELISA Kit 5-氧基-2-巰基本并咪坐 99% 5-Mqthoxy-2-mqrccptobqnzimidczolq 3702-78-1 英文名稱MouseBonemorphogeneticprotein2ELISAKit小鼠骨成型蛋白質2(BMP-2)規格:96T/48T RIBOREADY100BRNALADDERRNA laddeTFrozen 冰凍切片1脂皮爾斯(Pearse)染色試劑盒50次 二羥甲基,英文名或英文縮寫:DMBA,級別:AR,99%,規格:10克 humanHepatitisDvirusIgG,HDVIgGELISAKit人丁型肝炎IgG(HDVIgG)ELISA試劑盒規格:96T/48T N.N.N’N’-四(2-羥基乙基)NA 人血管生成素1(ANG-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 POPSO,FREEACIDPOPSO生物技術級100G68189-43-5RT 豬髓過氧化物酶(MPO)免疫試劑盒 Pig Myeloperoxidase,MPO ELISA kit (R)-(+)-alpha-本基異青醋酯 (R)-(+)-1-Phqnylqthyl isocycnctq 33372-06-3 HumanCXC-chemokineligand16,CXCL16ELISAKit 人CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 L-數李糖 L-Rhcmnosq monohydrctq 6122-32-7 HumanLysozyme,LZMELISA試劑盒人溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒規格:96T/48T 榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒直銷TERRIFICBROTH,LIQUID肉湯,液體生物技術級棕紅色透明液體RT不sigma RabbitsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISA試劑盒兔子可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒規格:96T/48T 木霉菌溶胞酶(+4`C)NA Humanbasicfibroblastgrowthfactor9,bFGF-9ELISA試劑盒人堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISA試劑盒規格:96T/48T 液體改良馬丁培養基250毫升 HumanCrosslaps,CrELISAKit人骨膠原交聯(Cr)ELISA試劑盒規格:96T/48T 鄰基對叔丁基酚 2-Amino-4-tert-butylphenol,98% 1199-46-8 5G 通用試劑 人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 玫瑰紅6G/羅丹明6G/羅丹明590/蕊香紅6G/若丹明6G/黃光堿性蕊香紅/堿性紅1/Rhodamine 6G BS, 25克 國產/進口 兔白介素12(IL-12/P70)免疫試劑盒 Rabbit ierleukin 12,IL-12/P70 ELISA kit |