細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）大鼠雪旺細胞；RSC96培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產品描述：
細胞名稱 大鼠雪旺細胞；RSC96培養(yǎng)
形態(tài)特性神經元

生長特性貼壁生長

特征特性RSC96細胞株是原代培養(yǎng)的大鼠雪旺細胞經長時間培養(yǎng)后自發(fā)轉化而成的[PubMed:9766530]。2002年十二月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體。其后代通過BM細胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后六周，用Hoechst染色、PCR和標準培養(yǎng)測試進行支原體檢測。結果都呈陰性。

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。

傳代情況PN5

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到大鼠雪旺細胞；RSC96培養(yǎng)后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
CM-R109大鼠腦成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL

LRG1 Others Human 人 LRG1 人細胞裂解液 (陽性對照)

馬間充質干細胞-脂肪HMSC-ad

C2C12細胞，人肌肉成纖維細胞瘤 人腎癌細胞系,ACHN細胞 人肺微血管內皮細胞HPMEC

豬小腸上皮細胞;ZYM-DIEC02

PAPPA2 Others Human 人 PAPPA2 / Pappalysin 2 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠雪旺細胞；RSC96培養(yǎng)雞肌紅蛋白(MYO/MB) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人抑制素B(INH-B)免疫試劑盒 Human inhibin B,INH-B ELISA Kit

可溶性彈性蛋白片段(sELAF)ELISA試劑盒 ，英文名： sELAF ELISA Kit

RatdipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISA試劑盒大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humandeoxyuridineiphate,DPELISA試劑盒人脫氧尿三磷酸(DP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humangrowth-regulatedoncogeneα/melanomagrowthstimulatingactivity,GROα/MGSAELISAKit人生長調節(jié)致癌基因α/黑素瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
冷凍保存細胞之方法：
大鼠雪旺細胞；RSC96培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。