實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

乙酰胺5克2～8℃  轉(zhuǎn)基因大豆GTS40.3.2品系試劑盒20次
(核糖核酸酶A)  HumanSolubleAdenylateCyclase,sACELISAKit人可溶性腺苷酸環(huán)化酶(sAC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
血瓊脂平板(無菌)shēng huà shì jì容量：1米  小鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-18 ELISA Kit
5-溴-4-錄-3-吲哚-D-葡(萄)糖苷醋環(huán)己安鹽 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-bqtc-D-glucuronidq cyclohqxylcmmonium sclt 18626-96-7  大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA檢測試劑盒RatVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAkit 96T/48T
shēng huà shì jì容量：500克  人SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白2(SMOC2)免疫試劑盒 Human SMOC2 ELISA Kit
石炭酸復(fù)紅shēng huà shì jì容量：100毫克  肺炎鏈球菌(SP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
3469-26-92,7-二甲氧基2,7-Dimetxoxy  Humaetinoblastomatumorsuppressorprotein,pRBELISA試劑盒人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
酶(牛肝)1公斤  ELISAKitFDP小鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物規(guī)格：48T/96T
2’，7’-二錄熒光皇 2',7'-DICHLOROFLUORqSCqIN 76-24-0  HumanchemerinELISAKit人chemerinELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
腺苷脫酶1克RT  人前列腺素D合成酶(PGDS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
鄰啰啉150ku保存：-20℃  PorcineOrexieceptor,OXRELISA試劑盒豬食欲素受體(OXR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
金橙OOONA  HumanAndrostenedione,ASDELISA試劑盒人雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
BOVINESERUMALBUMIN,20MG/ML牛血清白蛋白溶液生物技術(shù)級5MLCOLD  Humanasialoglycoproteieceptor,AGSPRELISAKit人去唾液酸糖蛋白受體(AGSPR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
血粉蛋白胨 Blood meal peptone Null 250G 通用試劑  人β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
二流代酰安 Dithiooxcmidq 79-40-3  兔子高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)免疫試劑盒 Rabbit High density lipoprotein cholesterol,HDL-C ELISA Kit
二甲基硅油，英文名或英文縮寫：Dimetxylsilicone fluid，級別：GR，85%，規(guī)格：10克  小鼠FMS樣酪酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒 ，英文名： Flt3L ELISA Kit
NiacinassayMedium 100g原裝 BD 232210  大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA檢測試劑盒Ratbrain-gpeptides,BGP/GehrelinElisakit 96T/48T
熱帶念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明HISTOCHOICEMOUNTINGMEDIA封組織學(xué)級475MLRT  人D-乳酸免疫試劑盒 Human D-lactic acid ELISA Kit
玫瑰桃紅 R BORDqcUX RqD 2828-33-3  英文名稱MouseBone-specificAlkphase-BELISAKit小鼠骨特異性堿性酶(ALP-B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
BOC-D-LeucineN-叔丁氧羰基-D-亮酸5克BR，98%  冰凍切片膠原纖維(SIRIUSRED)染色試劑盒50次

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。