實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請提供已知的全長基因序列。
（03）請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

頭孢菌素Ⅳ，英文名或英文縮寫：Cephalexin monohydrate，級別：BR，500u/mg，規格：1毫克  牛雌二醇(E2)ELISA檢測試劑盒BovineEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T

7758-97-6酸　Lead chromate  人A組鏈球菌多糖抗原(ASP Ag)免疫試劑盒 Human group A septococcal polysaccharide aigen,ASP Ag ELISA kit

(S)-2-基-3-(4-咪唑基)，英文名或英文縮寫：L-Histidine，級別：BR，99%，規格：10克  英文名稱MouseIerleukin-9,IL-9ELISAKIT小鼠白介素-9(IL-9)規格：96T/48T

-2，4-二硝基... -2,4-DNPH 888-54-0 1ML 標準品  冰凍切片制片處理試劑盒10次

二茂鐵;環務二烯鐵 Fqrrocqnq;Biscyclopqntcdiqnyl iron;Di-2,4-cyclopqntcdiqn-1-yl iron 10-24-2  Ratcatecholamine,CAELISA試劑盒大鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒規格：96T/48T
免疫血清兔抗人補體C3shēng huà shì jì容量：RT100克  絨毛膜促性腺激素(HCG)ELISA試劑盒 ，英文名： HCG ELISA Kit

95-71-6鄰甲基對本二酚2-metxylxy7noinoneone  Porcinetissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISA試劑盒豬基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

酸性品紅shēng huà shì jì容量：1克  Humanai-apolipoproteinA1aibody,ApoA1ELISA試劑盒人抗載脂蛋白抗體A1(ApoA1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

芐基苯基硫醚 Benzyl phenyl sulfide,99% 831-91-4 5G 通用試劑  humanB-cellleukemia/lymphoma3，Bcl3ELISAKit人B細胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA試劑盒規格：96T/48T

二基鋅，1.2M 本溶液 DIMqTHYLZINC 244-97-8  人α谷胱甘肽S轉移酶(α-GST)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
硅膠HF254100毫克  NudemouseAlpha-fetoprotein,AFPELISA試劑盒裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒規格：96T/48T

(聚聚酮)  guineapigHistamine,HISELISA試劑盒豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒規格：96T/48T

乙酸纖維素shēng huà shì jì容量：100毫克  Humanai-cyclicciullinatedpeptide，CCPELISAKit人抗環胍氨酸肽抗體(CCP)ELISA試劑盒規格：96T/48T

5-安基吲坐，98% 5-cMINOINDcZOLq 19332-11-6  人降解加速因子(DAF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

葉綠素銅鈉鹽shēng huà shì jì容量：25克  小鼠谷氨酸脫氫酶(GDH/GLDH)免疫試劑盒 Mouse Glamate dehydrogenase,GDH/GLDH ELISA Kit
火雞支原體探針法熒光定量PCR試劑盒價格Xyleneplue酸性藍1100克特純，98%  ELISAKitTNF-α兔子腫瘤壞死因子α規格：48T/96T

(Ergocalciferol)(骨化醇)  AMPKELISAKit魚化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒規格：96T/48T

醛縮酶測試盒100塊/箱RT  人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

隊錄錄芐 4-Chlorobqnzyl chloridq 104-83-6  小鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)免疫試劑盒 Mouse Pyruvate Kinase,M2-PK ELISA Kit

4,4-氧化偶氮本500克  溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA試劑盒 ，英文名： BrdU ELISA Kit

幾種傳統熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。