冷凍保存細(xì)胞之方法：
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM [COLO320DM]冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM [COLO320DM]
形態(tài)特性圓

的并能折光的

生長特性半貼壁生長

特征特性這株細(xì)胞CEA、CSAp和結(jié)腸抗原3呈陰性。角蛋白和波

纖維蛋白呈弱陽性

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況PN5

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM [COLO320DM]準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM [COLO320DM]后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-HtrA2/Omi/FITC熒光素標(biāo)記絲氨酸蛋白酶/線粒體絲氨酸蛋白酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-TRT/FITC熒光素標(biāo)記端粒酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-TRT/TERT/PE熒光素PE標(biāo)記端粒酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-COX10/FITC熒光素標(biāo)記COX10抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IAA/FITC熒光素標(biāo)記吲哚-3-乙酸抗體/植物生長素抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IAA/FITC熒光素標(biāo)記吲哚-3-乙酸抗體/植物生長素單克隆抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IASPP/FITC熒光素標(biāo)IASPP蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Iba-1/FITC熒光素標(biāo)記離子鈣接頭蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-ICAD/FITC熒光素標(biāo)記Caspase激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-ICAM-1(CD54)/FITC熒光素標(biāo)記細(xì)胞間粘附分子-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO 320DM [COLO320DM]*Anti-CAD/CPAN/FITC熒光素標(biāo)記Caspase激活的脫氧核糖核酸酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CAI/FITC熒光素標(biāo)記碳酸酐酶1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CAII/FITC熒光素標(biāo)記碳酸酐酶2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CalcineurinAlpha/PP-2Balpha1/FITC熒光素標(biāo)記蛋白磷酸酯酶-2B催化亞單位抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-caldesmon/smoothmuscle/FITC熒光素標(biāo)記鈣調(diào)結(jié)合蛋白/鈣調(diào)素結(jié)合蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-p-Caldesmon/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化鈣介質(zhì)素抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Smoothened/SMOH/FITC熒光素標(biāo)記跨膜蛋白Smoothened抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Calpain1/FITC熒光素標(biāo)記鈣蛋白酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Calpain2/FITC熒光素標(biāo)記鈣蛋白酶2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Calponin1/FITC熒光素標(biāo)記鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml
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