冷凍保存細胞之方法：
人非小細胞肺癌細胞；NCI-H358說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人非小細胞肺癌細胞；NCI-H358說明書
形態(tài)特性上皮細胞樣

生長特性貼壁生長

特征特性1981年從一位開始化療之前的患者的腫瘤組織中分離建株。超微結(jié)構(gòu)研究表明細胞質(zhì)中有Clara細胞的特征結(jié)構(gòu)細胞表達主要的肺表面結(jié)合蛋白SP-A的蛋白和RNA。不表達SP-B和SP-C。他們在軟瓊脂中的克隆

成效率為0.83%。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況P(121+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STRAmelogenin:X,Y；CSF1PO:11，12；D13S317:8，12；D16S539:12，13；D18S51:14；D19S433:13，14；D21S11:28，30；D2S1338:17，23；D3S1358:14，18；D5S818:10,12；D7S820:10，11；D8S1179:13，14；FGA:20,21；TH01:6；TPOX:8，9；vWA:17

同工酶

染色體

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人非小細胞肺癌細胞；NCI-H358說明書準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項：
?1.一般客戶拿到人非小細胞肺癌細胞；NCI-H358說明書后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-CD105/Endoglin/TGF-Betareceptor/RBITC紅色熒光素羅丹明(RBITC)標記CD105/轉(zhuǎn)化生長因子β受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD107a/LAMP-1/FITC熒光素標記溶酶體相關(guān)膜蛋白1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD107a/LAMP-1/PE熒光素PE標記溶酶體相關(guān)膜蛋白1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-nectin2/CD112/FITC熒光素標記細胞黏附分子CD112抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD117/FITC熒光素標記CD117抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD133Anti-gen/FITC熒光素標記造血干細胞抗原CD133抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-OX40/CD134/TNFRSF4/FITC熒光素標記CD134抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IL-7Ra/CD127/PE熒光素PE標記兔抗人、大、小鼠、馬、兔白細胞介素-7受體a抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD137/TNFRSF9/FITC熒光素標記CD137抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-CD133antigen/PE熒光素藻紅蛋白標記兔抗人、大、小鼠和果蠅CD133抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人非小細胞肺癌細胞；NCI-H358說明書*Anti-RXRAlpha/RXRA核受體RXRα抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-RXRgamma維甲酸受體G抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-RUNX1/AML1急性髓細胞白血病1蛋白抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-phospho-RUNX1/AML1(Ser249)磷酸化急性髓細胞白血病1蛋白抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-phospho-RUNX1(Ser303)磷酸化急性髓細胞白血病1蛋白抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Runx3Runx3抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-S6PDH6-磷酸山梨醇脫氫酶抗體規(guī)格：1ml

*Anti-S100BS100B蛋白抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-S100A1S100A1抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-S100A13S100A13抗體規(guī)格：0.1ml
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