細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人腎癌Wilms細(xì)胞；G401說(shuō)明書準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
我司常期代理ATCC

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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人腎癌Wilms細(xì)胞；G401說(shuō)明書
形態(tài)特性上皮樣

生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)

特征特性該細(xì)胞來(lái)源于一名3個(gè)月大的嬰兒的腎Wilms瘤，由于該類腫瘤分類的改變，經(jīng)Garvin等鑒定后發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞來(lái)源于腎橫紋肌樣瘤。該細(xì)胞分泌腎母細(xì)胞生長(zhǎng)因子（nephroblastgrowthfactor，NB-GF)。

培養(yǎng)條件McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS

傳代方法1:3傳代；3~4天1次。

傳代情況C5

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè)培養(yǎng)法（-）

STRAmelogenin：X，Y；CSF1PO：11，13；D13S317：9，14；D16S539：12；D18S51：14；D19S433：13，14；D21S11：31，32.2；D2S1338：18，24；D3S1358：16，18；D5S818：13；D7S820：11，14；D8S1179：13，14；FGA：24，27；TH01：8，9.3；TPOX：8，11；vWA：16；

同工酶

染色體亞二倍體，XY

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人腎癌Wilms細(xì)胞；G401說(shuō)明書后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
uPA*人尿激酶型纖溶酶原激活物規(guī)格48T/96T

UK*人尿激酶規(guī)格48T/96T

UP*人尿蛋白規(guī)格48T/96T

GDI*人鳥(niǎo)苷酸解離抑制因子規(guī)格48T/96T

GEF*人鳥(niǎo)苷酸交換因子規(guī)格48T/96T

ODC*人鳥(niǎo)氨酸脫羧酶規(guī)格48T/96T

ODC*人鳥(niǎo)氨酸脫羧酶規(guī)格48T/96T

OCT*人鳥(niǎo)氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶規(guī)格48T/96T

FAK*人黏著斑激酶規(guī)格48T/96T

MAdCAM-1*人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子規(guī)格48T/96T
人腎癌Wilms細(xì)胞；G401說(shuō)明書SnakepoisonProtein蛇毒蛋白SnakepoisonProtein蛇毒蛋白1mgSnakepoisonProtein蛇毒蛋白

突觸相關(guān)膜蛋白25抗原SNAP-25(synaptosomal-associatedprotein25)突觸相關(guān)膜蛋白25抗原0.5mgSNAP-25(synaptosomal-associatedprotein25

Socs1(suppressorofcytokinesignaling1)細(xì)胞激酶信號(hào)-1抑制劑（抗原）0.5mgSocs1(suppressorofcytokinesignaling1

細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原Socs3(suppressorofcytokinesignaling3)細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗原0.5mgSocs3(suppressorofcytokinesignaling3

超氧化物歧化酶1抗原SOD1(superoxide-dimutase-1)超氧化物歧化酶1抗原0.5mgSOD1(superoxide-dimutase-1

超氧化物歧化酶2抗原SOD2(superoxide-dimutase-2)超氧化物歧化酶2抗原0.5mlSOD2(superoxide-dimutase-2

solutecarrierfamily1溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原)0.5mgsolutecarrierfamily1溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原

Somatostatin/GRIH生長(zhǎng)抑素抗原Somatostatin/GRIH生長(zhǎng)抑素抗原0.5mgSomatostatin/GRIH生長(zhǎng)抑素抗原
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人腎癌Wilms細(xì)胞；G401說(shuō)明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。