細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人肝永生化細胞；THLE-3說明書準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人肝永生化細胞；THLE-3說明書
形態(tài)特性上皮細胞

生長特性貼壁生長

特征特性THLE-2(ATCCCRL-10149和THLE-3(ATCCCRL-11233)細胞系是正常肝細胞用SV40大T抗原轉(zhuǎn)染得到。將含有SV40T抗原的BglI-HpaI片段的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入兼嗜性包裝細胞株P(guān)A317中病毒。THLE-2andTHLE-3表達正常肝上皮細胞特征性的表型。當(dāng)注射到無胸腺裸鼠中時，它們不成瘤，具有接近二倍體的核型，不表達甲胎蛋白。THLE-2andTHLE-3將benzo[a]pyrene,N-nitrosodimet

培養(yǎng)條件CloneticsCorporation,Walkersville,MD21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號CC3170)。套裝包含了500毫升基本培養(yǎng)基及分別凍存的添加劑，我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5ng/mlEGF,70ng/mlPhosphoethanolamine。

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況PN5

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人肝永生化細胞；THLE-3說明書后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
我司常期代理ATCC

Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，人肝永生化細胞；THLE-3說明書貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。點擊進入了解更多轉(zhuǎn)化細胞。

hs-CRP*兔超敏C反應(yīng)蛋白規(guī)格48T/96T

C3*兔補體蛋白3規(guī)格48T/96T

PY*兔吡啶交聯(lián)物規(guī)格48T/96T

Cys-C*兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C規(guī)格48T/96T

IL-17*兔白介素17規(guī)格48T/96T

ADR*兔阿霉素規(guī)格48T/96T

Aβ1-40*兔β淀粉樣蛋白1-40規(guī)格48T/96T

p53*兔p53規(guī)格48T/96T

BAX*兔Bcl-2相關(guān)X蛋白規(guī)格48T/96T

8-epi-PGF2α*兔8-異構(gòu)前列腺素規(guī)格48T/96T
人肝永生化細胞；THLE-3說明書IntegrinalphaV巨噬細胞來源的趨化因子αV多肽IntegrinalphaV巨噬細胞來源的趨化因子αV多肽0.5mgIntegrinalphaV巨噬細胞來源的趨化因子αV多肽

IntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原IntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原0.5mgIntegrinalphaV/CD51peptide整合素αV抗原

IntegrinAlpha3整合素α3抗原IntegrinAlpha3整合素α3抗原0.5mgIntegrinAlpha3整合素α3抗原

整合素α4β7抗原IntegrinAlpha4Beta7/LPAM-1(LymphocytePeyer’spatchAdhesionMolecule1/Integrinalpha4,beta7)整合素α4β7抗原0.5mgIntegrinAlpha4Beta7/LPAM-1(LymphocytePeyer’spatchAdhesionMolecule1/Integrinalpha4,beta7

粘附分子整合素α5抗原IntegrinAlpha5(ITG-AlphaV/CD49e)粘附分子整合素α5抗原0.5mgIntegrinAlpha5(ITG-AlphaV/CD49e

IntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原IntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原0.2mlIntegrinAlphaE2/CD103整合素αE2抗原

IntegrinBetachain(ITG-Beta3/ITGB3)整合素-β3（抗原）0.5mgIntegrinBetachain(ITG-Beta3/ITGB3

粘附分子整合素β1抗原integrinBeta1(ITG-Beta1/CD29)粘附分子整合素β1抗原0.5mgintegrinBeta1(ITG-Beta1/CD29
冷凍保存細胞之方法：
人肝永生化細胞；THLE-3說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。