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大鼠elisa試劑盒間接法成功的關鍵
點擊次數:1071 更新時間:2018-06-04
 

大鼠elisa試劑盒間接法成功的關鍵在于抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果,但應盡可能予以純化,以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質,例如以E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質,例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白,也會因竟爭吸附而影響包被效果。

間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的特異性IgG只占總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強,非特異IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中,抗原包被后一般用無關蛋白質(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空余間隙。另外,在檢測過程中標本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,ELISA試劑盒可用此法檢測特異性抗體。

其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。大鼠elisa試劑盒洗滌除去抗原中的雜質,然后再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBcELISA試劑盒一般采用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌后再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般采用此法。

小鼠轉化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒 ,英文名: TGF-α ELISA Kit

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