問題：我現(xiàn)在剛開始做石蠟切片免疫組化，具體操作過程中有些問題想要咨詢一下
1.脫蠟至水：二甲苯I II 各10分鐘后 100% 95% 85% 75%酒精各多久呢？
2.只搞一個濃度的酒精如95%時(shí)間稍微長一些可以嗎？
3.抗原修復(fù)：可以枸櫞酸加熱至沸騰再放入切片保溫5-10分鐘嗎?冷卻至室溫這步可以將切片拿出來冷嗎?
4.加一抗后37度2-3小時(shí)這步要怎么操作,切片怎樣放在水浴箱呢?
5.DAB用前幾天的可以嗎?一定要現(xiàn)用現(xiàn)配嗎?
6.蘇木精復(fù)染要幾分鐘呢?弱弱的問一下這步的作用是什么?
答：
針對脫蠟問題：
以后各5分鐘,是搞兩個濃度的酒精,如95%,因?yàn)橛镁昧司蜁♂?
脫蠟的時(shí)候酒精的濃度要從高向低，我一般是二甲苯--二甲苯--100％酒精--100％酒精--95％酒精--80％酒精
針對抗原修復(fù)問題：
抗原修復(fù)比較重要，一般是在90度以上15分鐘，先把片子放進(jìn)去然后加熱，15分鐘后讓其自然冷卻，也可以將抗原修復(fù)的容器放在一盆冷水里，讓其環(huán)境冷卻后再將片子拿出來。
我是這樣做的:微波（MW）加熱過程如下：在盒內(nèi)放入200ml檸檬酸緩沖液（PH6.0±0.1），并蓋上帶有小孔的蓋子，微波加熱至沸騰；將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架中，放入已沸騰緩沖液中，采用微波爐中等功率800W,微波爐選用解凍檔的國產(chǎn)家用微波爐(建議用醫(yī)用微波爐)，中檔繼續(xù)處理10-20分鐘；取出微波塑料缸冷卻至室溫，從緩沖液中取出玻片，片子經(jīng)蒸餾水沖洗二次，之后用PBS（PH7.2-7.4）沖洗兩次，每次3分鐘。
經(jīng)高溫后冷卻這一步不能省略.個人觀點(diǎn)，15分鐘的冷卻是必須的：
（1）如這一步省略，對于有些抗體而言，會降低AR-IHC染色強(qiáng)度。
（2）突然從高溫到低溫可導(dǎo)致組織片掉片。
（3）可能引起形態(tài)學(xué)的變化。(所以不要拿出來呀)
針對第四個問題：
我一般一抗孵育都是放在4度冰箱里過夜
針對第五個問題：
DAB要現(xiàn)配現(xiàn)用，在30分鐘內(nèi)用完，我一般DAB顯色30秒，效果還可以，但具體情況還是要具體分析，在顯微鏡下看情況而定，但是如果超過10分鐘都沒有顏色的話就說明染色失敗了
針對第六個問題：
蘇木素是染細(xì)胞核的，我一般染 1 分鐘，復(fù)染時(shí)間不等,有的30S,有的幾分鐘,根據(jù)組織,你自己多做幾張摸索一下.作用是染細(xì)胞核.
|
