HEC-1-B人子宮內膜腺癌細胞實驗操作步驟：
實驗操作步驟完成后，需立即進行細胞狀態(tài)觀察與數(shù)據(jù)記錄。將培養(yǎng)皿置于倒置顯微鏡下，檢查細胞貼壁情況、形態(tài)變化及融合度。若發(fā)現(xiàn)細胞懸浮或碎片增多，可能提示消化過度或培養(yǎng)基異常，需調整作用時間或更換新鮮培養(yǎng)基。記錄細胞密度（建議80%-90%融合時傳代）及異常現(xiàn)象，作為后續(xù)實驗的參考依據(jù)。
接下來進行細胞傳代：
1. 棄舊液：傾斜培養(yǎng)瓶，用移液槍吸盡舊培養(yǎng)基，避免觸碰瓶底細胞層。
2. PBS清洗：加入4℃預冷的PBS 3mL，輕搖5秒后棄去，重復兩次以清除血清殘留。
3. 消化控制：加入0.25%-EDTA 1mL，37℃孵育30秒后迅速取出，輕拍瓶壁至細胞層出現(xiàn)霧狀脫落（鏡下確認）。立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打時避免氣泡產(chǎn)生。
對于凍存復蘇的HEC-1-B細胞，需特別注意：
- 解凍后離心（1000rpm, 5min）更換新鮮培養(yǎng)基，以去除DMSO毒性。
- 傳代前延長培養(yǎng)至72小時，確保細胞代謝穩(wěn)定。
關鍵提示：
- 該細胞系對溫度敏感，所有操作需在超凈臺內快速完成。
- 每3代進行一次支原體檢測，避免交叉污染。
- 推薦使用McCoy’s 5A培養(yǎng)基（添加10% FBS），pH值嚴格控制在7.2-7.4。 |
