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家豬皮膚來源細胞操作步驟
點擊次數:133 更新時間:2025-06-25

家豬皮膚來源細胞操作步驟:
在完成細胞分離后,接下來的關鍵步驟是細胞的培養與傳代。首先,將分離得到的細胞懸液以1000rpm離心5分鐘,棄去上清液,用預熱的培養基(如DMEM/F12,含10%胎牛血清和1%雙抗)重懸細胞沉淀。隨后,將細胞懸液均勻接種于預先用0.1%明膠包被的培養皿中,置于37℃、5% CO?的恒溫培養箱中靜置培養。

24小時后,需在倒置顯微鏡下觀察細胞貼壁情況。若貼壁良好,可更換新鮮培養基以去除未貼壁的死亡細胞;若貼壁率較低,需檢查消化時間或培養基成分是否適宜。此后每2-3天更換一次培養基,直至細胞融合度達到80%-90%。

傳代時,用PBS輕柔洗滌細胞2次,加入0.25%EDTA消化液覆蓋細胞層,37℃孵育1-2分鐘。鏡下觀察到細胞間隙增大、形態變圓后,立即加入含血清的培養基終止消化,吹打形成單細胞懸液。按1:2或1:3比例分瓶傳代,并記錄代次。

為維持細胞特性,建議定期進行支原體檢測和核型分析。對于后續實驗(如基因編輯或誘導分化),需在細胞狀態穩定(通常3-5代內)時開展,以確保實驗結果的可靠性。

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