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鴨瘟(DVE)Elisa試劑盒操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):180 更新時(shí)間:2024-11-05

鴨瘟(DVE)Elisa試劑盒操作步驟:


1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1


孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)


2. 加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先


加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不


觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,


3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。


4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用


5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此


重復(fù)5 次,拍干。


6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。


7. 溫育:操作同3。


8. 洗滌:操作同5。


9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色


15 分鐘.


10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。


11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止


液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


計(jì)算和結(jié)果判定:


試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10


臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15


陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為鴨瘟(DVE)陰性


陽性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為鴨瘟(DVE)陽性



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