小鼠角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。 二．細(xì)胞處理： 1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法： 方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 蘇云金芽胞桿菌加拿大亞種 Bacillus thuringiensis subsp. canadensis 蘇云金芽胞桿菌科爾默亞種 Bacillus thuringiensis subsp. colmeri 蘇云金芽胞桿菌達(dá)爾可他亞種 Bacillus thuringiensis subsp. dakota 蘇云金芽胞桿菌達(dá)姆斯塔特亞種 Bacillus thuringiensis subsp. darmstadiensis 蘇云金芽胞桿菌松蜀亞種 Bacillus thuringiensis subsp. dendrolimus 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
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