在大鼠ELISA試劑盒操作中，我們都認(rèn)為ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。
常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，因?yàn)楹苋菀妆幌吹簟Ｒ虼怂邢礈煲褐幸脖仨毺砑臃忾]液。請(qǐng)勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會(huì)降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們與開(kāi)放位點(diǎn)結(jié)合并封閉，同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚(yú)明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過(guò)，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)問(wèn)題的一種方法是使用雞或魚(yú)的正常血清。 |
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