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人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)正確的操作方法是什么?
點(diǎn)擊次數(shù):937 更新時(shí)間:2018-08-14

   人ELISA試劑盒在測(cè)定此類激素時(shí),有必要在接近相連的時(shí)間距離內(nèi)采用數(shù)份血樣本,以其中心值為測(cè)定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測(cè),應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測(cè)。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面:
(1)要留心避免出現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡(jiǎn)單在溫育進(jìn)程中吸附于固相,然后與后邊參與的HRP底物反應(yīng)顯色。
(2)樣本的收集及血清分別中要留心盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)作分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定辦法發(fā)作非特異性攪擾。
(3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分別,則能夠在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須留心避免因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)作的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)作損壞作用,然后引起假陰性作用。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留心,不要進(jìn)行劇烈振蕩,重復(fù)倒置混勻即可。
(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所形成的的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心堆積后取上清檢測(cè)。
    在臨床實(shí)驗(yàn)室,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太留心,一般的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用,而忽略了這種做法有可能影響后邊溫育時(shí)間不可的問(wèn)題,其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備zui為要害的是,在實(shí)驗(yàn)開(kāi)端前,將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在運(yùn)用前與室溫平衡。這樣做的目的,首要是為了在后邊的溫育反應(yīng)進(jìn)程中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地抵達(dá)所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。其次,現(xiàn)在的產(chǎn)品人ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用時(shí)對(duì)所供給的濃縮液稀釋,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前暫時(shí)。

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人ELISA試劑盒

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