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DAB顯色和蘇木素復染時間
點擊次數:1592 更新時間:2015-07-08

DAB顯色和蘇木素復染時間
DAB顯色以鏡下出現棕黃色顆粒為準,具體時間依DAB濃度和其他因素而不同,切記當鏡下出現棕黃色顆粒后應及時終止顯色,否則背景也是一片黃色,影響染色結果判斷。蘇木素復染時間雖然對染色結果判斷影響不大,但如果想有漂亮的免疫組化圖片,也應該掌握蘇木素復染的技巧。我的經驗是復染30-60s,然后用0.1%鹽酸酒精分化約5-10s。ELISA試劑盒

需要說明的是,因為DAB和蘇木素制劑不同,顯色和復染的時間需根據實驗結果不斷調整。

適當的PBS沖洗可使染色背景更加清晰,建議在沖洗一抗的時候先用0.1%Tween20-PBS(0.5ml Tween20用PBS定容至500ml),然后PBS沖洗兩遍。此外,對于定位于核或核膜的抗原,可在孵育一抗是加入Triton,Triton可穿透核膜,起到一個“打孔機"的作用,有利于抗體和抗原的結合。還有一點一定要注意的是,實驗過程中切片切勿干燥,如果切片干了,這張片子就報廢了!

免疫組化看似簡單但要想染的漂亮卻不容易,ELISA試劑盒我知道的幾個做的都抱怨以后再也不想做免疫組化了。

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